CANTUA Vol. 20 (1): 16-19 (2021). Versión Online ISSSN 2709-8817
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Factores de crecimiento epidermal e insulínico en fluido folicular ovárico de la alpaca
Epidermal and insulin growth factors in follicular fluid of alpaca ovary
Juan Valladares1, Duriel Mamani1, P. Walter Bravo1*
1 Escuela de Medicina Veterinaria, Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco,Cusco, Perú.
*Autor corresponsal: P- Walter Bravo, pedro.bravo@unsaac.edu.pe
RESUMEN
Las concentraciones del factor de crecimiento epidermal (EGF) y factor de crecimiento insulínico (IGF-I) fueron determinados en
folículos ovarios de alpacas durante diferentes fases de su desarrollo. Dieciséis alpacas hembras fueron ecografiadas para
determinar pequeños folículos (4-5 mm), folículos ovulatorios (7-10 mm), y folículos en regresión (12-6 mm). Cinco alpacas de
cada grupo fueron sacrificadas para colectar el fluido folicular. Las muestras fueron congeladas a -20 °C hasta su análisis por el
método ELISA. La concentración de EGF fue diferente (P<0.05) siendo 3.9, 3.7 y 0.9 pg/mL para pequeños, ovulatorios y en
regresión, respectivamente. La concentración de IGF fue similar para los tres tamaños de folículos ováricos, siendo 1.3, 1.3 y 1.5
ng/mL para folículos pequeños, ovulatorios y en regresión. En conclusión, EGF varió de acuerdo al tamaño folicular, no así IGF
que no varió de acuerdo con el tamaño folicular ovárico.
Palabras clave: factor crecimiento, epidermal. insulínico, folículo antral, alpaca.
ABSTRACT
The concentrations of epidermal growth factor (EGF) and insulin-like growth factor (IGF) were determined in alpaca ovarian
follicular fluid of different phases of development. Fifteen female alpacas were ultrasound to determine small follicles (4 – 5 mm),
ovulatory-sized follicles (7-10 mm), and regressing follicles (12 – 6 mm). Five alpacas of each group were slaughtered to collect
follicular fluid. Samples were stored at -20 °C until analysis with commercial EGF and IGF by ELISA method. The EGF
concentrations differed (P<0.05), 3.9, 3.7, and 0.9 pg/mL. for small, ovulatory, and regressing follicles, respectively. The IGF
concentrations were not different (P>0.05), being 1.3, 1.3, and 1.5 ng/mL for small, ovulatory, and regressing follicles, respectively.
In conclusion, EGF varied according to ovarian follicle size, and IGF-I did not vary for ovarian follicle size.
Key words: growth factor, epidermal, insulinic, antral follicle, alpaca.
INTRODUCCIÓN
Los factores de crecimiento son péptidos involucrados en el
crecimiento celular y tisular. Ellos son reconocidos por su rol
en el desarrollo reproductivo así como actividades
reproductivas (Alan & Kulak, 2021). Ellos son también parte
del líquido folicular que se forma por transudación de las
células tecales y granulosas de los folículos ováricos (Guerreiro
et al., 2018). Uno de los factores más estudiado es el factor
insulínico 1 y que está presente en concentraciones sustanciales
en cerdas (Hsu et al., 1987), y vacas (Rivera & Fortune, 2003).
En general, están involucrados en la activación de la meiosis
(May et al., 1988). El factor epidermal está también presente
en folículos ováricos y pueden participar en la proliferación de
las células granulosas (Bendell & Dorrington, 1990). Aún más,
el factor epidermal constituye un enlace entre la hormona
folículo estimulante y la diferenciación de la célula granulosa
(Feng et al., 1987). En conjunto, estos dos factores están
asociados en el crecimiento folicular, maduración folicular y
maduración del ovocito.
Los ovarios de alpacas desarrollan folículos en forma de
onda durante la fase folicular del ciclo ovárico. Una onda es
iniciada cuando un grupo de pequeños folículos, 3 a 5 mm,
inician su crecimiento, luego un solo folículo dominante se
vuelve ovulatorio con 7 a 12 mm en diámetro, y si la cópula no
ocurre el mismo folículo empieza a regresionar y desaparece
(Bravo et al., 1989). Esta sucesión de crecimiento y atresia es
alternada en 85% de los casos entre los ovarios derecho e
izquierdo. Funcionalmente, se reconocen, pequeños folículos
(3-5 mm), folículos ovulatorios (7-12 mm) y folículos en
regresión (12-6 mm).
De igual manera en alpacas, las gonadotropinas de la
pituitaria y los esteroides gonadales han sido asociadas a la
presencia de folículos ováricos. La hormona folículo
estimulante está asociada levemente con folículos ovulatorios
en la llama, una especie parecida a la alpaca. La hormona
luteinizante se reporta en concentraciones basales durante la
fase folicular del ciclo ovárico (Bravo et al., 1990a) y solamente
se eleva después de la cópula y en la presencia de estradiol 17-
β (Bravo et al., 1990b). Sin embargo, en Camélidos
Sudamericanos no existen reportes de los factores de
crecimiento epidermal e inslínico y muy en especial durante las
tres fases del desarrollo folicular, y este es el principal objetivo
de este estudio.
METODOLOGÍA
Este estudio consideró 15 alpacas adultas con historia
reproductiva que fueron mantenidas en pasturas naturales en el
centro experimental La Raya, de la Universidad Nacional de
San Antonio Abad del Cusco, y que está a 4200 msnm.
La ecografía de los ovarios fue realizada con un ecógrafo
Aloka 500 de uso veterinario y con un transductor rectal lineal
prostático de 7.5 MHz. La ecografía se usó una vez por semana
para determinar los tres tipos funcionales de folículos ováricos
por una fase folicular completa. Luego las hembras fueron
divididas en tres grupos con cinco hembras en cada grupo. Los
grupos fueron: hembras con folículos pequeños (3-5 mm),
hembras con folículos ovulatorios (7-12 mm), y hembras con
folículos en regresión (11-7 mm). Las hembras fueron
sacrificadas siguiendo el protocolo de tratamiento humano de la
estación experimental y los ovarios fueron aislados
inmediatamente para llevarlos al laboratorio. El tamaño
folicular fue medido con una regla Vernier y confirmó lo
evaluado por ecografía. Su fluido fue aspirado introduciendo la
aguja 21G por la base del folículo. El fluido fue congelado y
almacenado en tubos Eppendorf de 1.5 mL a -20 °C hasta su
análisis.
Los factores de crecimiento epidermal e insulínico fueron
determinados por el método ELISA de Sigma laboratorios. El
protocolo seguido fue recomendado por el vendedor. La validez
del ensayo fue por paralelismo de la curva standard con una
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dilución seriada de una muestra de folículo ovulatorio y que se
muestra en la Figura 1.
Los coeficientes de variación dentro del ensayo fueron
menos del 5% por cada factor de crecimiento. Los datos fueron
analizados usando el programa estadístico Number Crunching
Statistical System (Layton, UT, USA), por el método general
de análisis de varianza. Los promedios fueron comparados por
la prueba de Tukey con una significancia de 0.05.
RESULTADOS
No existió desacuerdo entre los diámetros de folículos
ováricos medidos por ecografía y con la regla Vernier. El
acuerdo entre diámetro de los folículos ováricos medidos por
ecografía y al momento del sacrificio animal se muestran en la
Tabla 1.
Los promedios y errores standard de los promedios de los
factores de crecimiento epidermal e insulínico se presentan en
el Tabla 2 y Figura 2.
Tabla 1. Diámetro de los folículos ováricos (mm) determinados
por dos métodos, ecografía in-vivo, y con regla Vernier,
después del sacrificio, en alpacas con diferentes tamaños
foliculares. Pearson X225,10 = 0.99.
Tamaño
Ecografía
Regla Vernier
Pequeños
4
4
5
4.9
3
3
4
4.1
5
5
Ovulatorios
8
8
10
10
9
9
8
8
11
11
Regresión
7
7
5
5
6
6
6
6
5
5
DISCUSIÓN
La concentración del factor de crecimiento epidermal fue
similar entre folículos pequeños y ovulatorios, sin embargo,
menores en folículos en regresión. Esta diferencia podría
indicar la acción de este factor, mayor cuando los folículos son
pequeños y ovulatorios, y menor cuando los folículos están
regresión. La presencia de este factor también puede indicar
que su acción es manifiesta a nivel de las células granulosas de
la pared folicular que acompañan al ovocito, y como ha sido
demostrado en ovejas (Monget & Monniaux, 1995), y cerdas
(Hsu et al., 1987). De igual manera también puede afectar la
selección del folículo dominante (Mazerbourg & Monget,
2018).
El factor de crecimiento insulínico a sido extensivamente
estudiado en una variedad de especies como la oveja, cerda, y
aún en humanos. En todos esos trabajos ha sido asociado a la
activación de la mitosis de las células granulosas y tecales. En
cerdas (Veldhuis et al., 1986), vacas (Rutter & Manns, 1991;
Rivera & Fortune, 2003), y ovejas (Monget et al., 1993) no se
encontró una relación exacta con el tamaño folicular. En
contraste, una relación negativa ha sido reportado en cerdas
(Howard & Ford, 1992). Esta diferencia puede ser atribuida a
las diferentes especies en el lugar de síntesis de IGF en el
ovario. En el presente estudio, las concentraciones del factor
insulínico fue similar para folículos pequeños, ovulatorios y en
regresión lo que sugiere una falta de relación entre este factor
de crecimiento y el tamaño del folículo. Un solo reporte del
factor insulínico fue encontrado en alpacas, pero no se hizo
referencia al estado de desarrollo folicular (Pacheco & Coila,
2010). De igual manera, no se encontró una relación entre el
factor insulínico y tamaño folicular en camellas (El-Barh et al.,
2015).
En la alpaca, los resultados de este reporte sugieren
fuertemente que el factor epidérmico podría ser implicado en
las acciones del factor insulínico de otras especies. De igual
manera en este estudio un enfoque sistemático fue usado para
determinar el estado del tamaño folicular con una diferencia
clara entre los folículos ováricos. Esto constituye una ventaja
para entender mejor las acciones de los dos factores epidermal
e insulínico.
Figura 1. Comparación por paralelismo de las curvas estándar
del factor de crecimiento insulínico (panel superior), y del
factor de crecimiento epidérmico (panel inferior) con muestras
de líquido folícular ovárico de alpacas.
CONCLUSIONES
El factor de crecimiento epidermal fue mayor en folículos
pequeños y ovulatorios que en folículos en regresión. El factor
insulínico fue similar entre folículos pequeños, ovulatorios y en
regresión. El factor epidermal estuvo presente en menores
concentraciones que el factor insulínico.
AGRADECIMIENTOS
Al programa de fortalecimiento de la investigación
“YACHAYNINCHIS WIÑARINANPAQ” de la Universidad
Nacional de San Antonio Abad del Cusco por financiar parte de
este estudio a Juan Valladares como tesis de pre-grado.
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Figura 2. Concentraciones de factores de crecimiento
epidermal (A) e insulínico (B) en fluido folicular ovárico en
folículos pequeños, ovulatorios y en regresión de alpacas.
Nota: Las unidades de medida por cada factor de crecimiento
Tabla 2. Promedio ± error standard del promedio para los factores epidermal e insulínico en líquido folicular ovárico de alpacas
durante la fase folicular del ciclo ovárico. Letras diferentes indica significancia estadística por la prueba de Tukey, por filas.
Factor
crecimiento
Pequeños
folículos
Folículos
ovulatorios
Folículos en
regresión
Valor P
Epidermal,
pg/mL
3.93 ± 0.2b
3.73 ± 0.4b
0.92 ± 0.2a
0.000008
Insulínico,
ng/mL
1.27 ± 0.1a
1.34 ± 0.1a
1.49 ± 0.1a
0.4413
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Presentado: 17/04/2024
Aceptado: 14/05/2024
Publicado: 08/07/2024
