Evaluación de la actividad coagulante, hemostática y toxicidad aguda
por vía oral y tópica del extracto seco hidroalcohólico al 70% de
Castilleja pumila (misk’icha).
Evaluation of the coagulant, hemostatic activity and acute toxicity
by oral and topical route of the hydroalcoholic dry extract 70% of
Castilleja pumila (misk’icha).
Recibido: 12 de marzo 2019 | Aceptado: 4 de mayo del 2019
Mendoza Shirley
1
1
Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco
.
Correo electrónico :
qfshirley25@gmail.com
Resumen
El presente trabajo tiene el objetivo de demostrar la actividad coagulante,
hemostática y toxicidad aguda vía oral y tópica del extracto seco
hidroalcohólico al 70% de Castilleja pumila (misk’icha), en muestras de
sangre venosa y en heridas producidas en ratones; el método utilizado
fue un análisis toquímico cualitativo y un estudio de solubilidad del
extracto hidroalcohólico al 70%. Se realizó un estudio cuasiexperimental
con postprueba únicamente y grupo control; además que los animales de
experimentación no se asignaron al azar; sino que dichos grupos ya estaban
formados antes del experimento. Se obtuvo un porcentaje de disminución
del tiempo de coagulación del 15.67%, para la dosis 3 (C3=1mg/mL), por
lo que se puede concluir que esta dosis es la más efectiva; y un porcentaje
de disminución del tiempo de protrombina del 44%, para la dosis
3 (C3=1mg/mL), por lo que se puede concluir que esta dosis es la más efectiva.
Para la hemostática se obtuvo un porcentaje del tiempo de disminución
de hemostasia del 10.34%, con la dosis 3 (C3=1000mg/kg) de donde
concluimos que esta es la dosis más efectiva. Según la metodología planteada
se tuvo en observación a los animales, y durante este tiempo no hubo
presencia signicativa, es decir, cambios morfológicos representativos,
determinando así que bajo esta prueba se produce una toxicidad tópica en
un grado mínimo, de cero a cuatro. Tampoco hubo presencia signicativa
en cuanto a los signos y síntomas en los animales, ni se produjo la muerte
de ninguno de ellos, por lo tanto, se determinó que a las dosis evaluadas el
extracto no presenta toxicidad aguda por vía oral. En conclusión, el presente
estudio brinda evidencia cientíca de Castilleja pumila para el tratamiento de
hemorragias, presenta leve a moderada toxicidad oral y dérmica.
Palabras claves: Castilleja pumila, extracto seco, coagulación, protrombina, hemostasia.
https://doi.org/10.51343/racs.v2i1.576
Ambiente, Comportamiento y Sociedad
(2019), 2, 1, 15-33 e ISSN 2709-8219X
Doi:
16
Ambiente, Comportamiento y Sociedad
(2019), 2, 1, 15-33
Abstract
The present work has the objective of demonstrating the coagulant,
hemostatic activity and acute toxicity via oral and topical of the 70%
hydroalcoholic dry extract of Castilleja pumila (misk’icha), in venous blood
samples and in wounds produced in mice; The method used was a qualitative
phytochemical analysis and a solubility study of the hydroalcoholic extract
at 70%. A quasi-experimental study was conducted with only post-test and
control group; furthermore, the experimental animals were not randomly
assigned; rather, these groups were already formed before the experiment. A
reduction percentage of the clotting time of 15.67% was obtained for dose 3
(C3 = 1mg / mL), so it can be concluded that this dose is the most eective;
and a percentage decrease in prothrombin time of 44%, for dose 3 (C3 =
1mg / mL), so it can be concluded that this dose is the most eective. For
hemostatics, a percentage of the hemostasis decrease time of 10.34% was
obtained, with dose 3 (C3 = 1000mg / kg) from which we conclude that this
is the most eective dose. According to the proposed methodology, the
animals were observed, and during this time there was no signicant presence,
that is, representative morphological changes, thus determining that under
this test a topical toxicity occurs in a minimum degree, from zero to four.
There was also no signicant presence in terms of signs and symptoms in
the animals, nor did any of them die, therefore, it was determined that at the
doses evaluated the extract does not present acute oral toxicity. In conclusion,
the present study provides scientic evidence of Castilleja pumila for the
treatment of bleeding, it presents mild to moderate oral and dermal toxicity.
Key words: Castilleja pumila, dry extract, coagulation, prothrombin, hemostasis.
Introducción
Desde tiempos pasados el hombre ha buscado solución a sus enfermedades y
afecciones, utilizando la ora y fauna de su entorno, y por ello al ir experimentando
con diferentes sustancias que la naturaleza le proveía, este conocimiento fue pasando de
generación en generación hasta nuestros tiempos. En un 80 por ciento de los casos hay una
concordancia entre lo que dice la tradición y el estudio toquímico. Las propiedades de las
plantas son conocidas por el mundo cientíco, por eso hay un porcentaje importantísimo
de remedios alopáticos y homeopáticos que se elaboran con ellas. Según la Organización
Mundial de la Salud (OMS), el 80 por ciento de la población mundial consume hierbas
medicinales para tratar algún tipo de afección. (Femenia, 2009).
Se sabe que los antiguos peruanos utilizaban plantas no solo como alimento,
también las empleaban para curar males que los aquejaban. Existen informaciones
bibliográcas y folklóricas en las que se dan a conocer el empleo de las plantas para
estos nes. Se sabe que las plantas medicinales fueron la base para diversos tratamientos
y diversos fármacos tienen su origen en plantas medicinales, en los que la ciencia y la
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tecnología han tenido un avance sorprendente, motivo por el cual la ciencia nos ayuda a
investigar sobre las diferentes propiedades que se les atribuye a las diferentes especies.
(Cabieses, 1980). Según el estudio Etnobotánico realizado por Rado (2011), quien
redacta sobre dicha especie vegetal, Castilleja pumila (Benth) Weed. “Misk’icha”, y sus
propiedades en el trabajo de tesis “Etnobotánica del Distrito de Ocongate - Cusco”; que
los usos que se le atribuye a esta especie vegetal son como infusión de toda la planta para
aliviar hemorragias, y utilizado también como parches; sobre heridas y raspones, lo que
permite actuar como cicatrizante y hemostático. (Rado, 2011).
El Perú posee recursos naturales con actividad terapéutica, los cuales existen en
los reportes etnobotánicos de plantas medicinales, alguno de ellos usados en procesos
de hemorragia; este es el caso de Castilleja pumila (Benth) Weed. “Misk’icha” es una
especie vegetal nativa perteneciente a la familia de las Orobanchaceae y cuyo nombre
común es de origen quechua, dentro del Departamento del Cusco, y cuyas características
intrínsecas de la especie ayudan a su reconocimiento dentro de la ora regional.
En el presente estudio se evalúo la actividad coagulante y hemostática; así como
la toxicidad aguda por vía oral y tópica del extracto seco hidroalcohólico de toda la planta
de Castilleja pumila (Benth) Weed. “Misk’icha”; por lo tanto, tiene el objeto de validar
cientícamente el uso terapéutico de Castilleja pumila (Benth) Weed. “Misk’icha” sobre
la Coagulación.
Metodología
Se realizó un estudio cuasiexperimental con postprueba únicamente y grupo
control; además que los animales de experimentación no se asignaron al azar; sino que
dichos grupos ya estaban formados antes del experimento. Esto relacionado a que el
diseño incluye dos grupos, uno que recibe el tratamiento experimental y el otro no, el cual
viene a ser el grupo control; ambos grupos se les realiza una medición sobre la variable
independiente de estudio.
Para la determinación del tiempo de coagulación y el tiempo de protombina se
utilizó el método de White y el método de Quick, respectivamente; para ello, se utilizaron
muestras de sangre humana de 10 voluntarios, las muestras fueron divididas en tres para
tres dosis diferentes (C1=0.01mg/mL), (C2=0.1mg/mL), (C3=1mg/mL); del extracto
seco hidroalcohólico al 70% de Castilleja pumila (misk’icha). Para la determinación de
la actividad hemostática se realizó aplicando el método de sangría de Ivy Modicado,
para lo cual se utilizaron 50 ratones albinos Mus musculus, a los cuales se les realizó
cortes con el propósito de producir una hemorragia considerable, administrándoles las
dosis respectivas; (C1=10mg/kg), (C2=100mg/kg), (C3=1000mg/kg) del extracto seco
hidroalcohólico al 70% de Castilleja pumila (misk’icha). Para la determinación de
toxicidad aguda por irritación dérmica se hizo mediante el criterio de Draize; y la prueba
de toxicidad aguda por vía oral bajo el criterio de Lorke del extracto seco hidroalcohólico
al 70% de Castilleja pumila (misk’icha).
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Análisis de resultados
Determinación de Porcentaje de Humedad de la planta Castilleja pumila “misk’icha”.
Tabla 1
Porcentaje de humedad de la planta Castilleja pumilla (misk’icha)
Muestra
Placa
N°
Peso de la
muestra
fresca (gr)
Peso de la
muestra
seca (gr)
Porcentaje
de Humedad
(%)
Promedio
(%)
Planta de Castilleja
pumila “misk’icha”
(tallos, hojas, ores)
1 5 0.924 81.52
80.62
2 5 0.9885 80.23
3 5 0.9935 80.13
El porcentaje de humedad de la planta de Castilleja pumila “misk’icha” que es de
80.62% (muestra por triplicado), este maniesta un porcentaje alto de humedad, por lo
tanto, el secado y la conservación de esta especie en estudio se debe manejar con mucho
cuidado, corriendo el riesgo de que se produzca hidrólisis, oxidación o deshidrogenación.
(Alzamora, 2001).
Determinación de Porcentaje de Rendimiento del extracto seco hidroalcohólico al
70% de Castilleja pumila “misk’icha”.
Tabla 2
Porcentaje de rendimiento del extracto seco hidroalcohólico al 70% de Castilleja pumila
“misk’icha”.
Muestra Peso de la mues-
tra fresca (g)
Peso de la muestra
seca (g)
Promedio (%)
Planta de Castilleja
pumila “misk’icha”
(tallos, hojas, ores)
molida
10.12 gr 2.371gr 23.42%
El resultado de Rendimiento, (Kuklinski C. 2000) de extracción obtenida por
maceración de la planta de Castilleja pumila “misk’icha” en etanol al 70%, obteniéndose
un valor de 23.42% lo que indica que se necesitó una considerable cantidad de la planta
para obtener un buen porcentaje de extracto. El porcentaje de rendimiento permite
determinar la cantidad de muestra necesaria para la realización de investigaciones con
extracto de la especie vegetal.
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Pruebas de Solubilidad del extracto seco hidroalcohólico al 70% de Castilleja pu-
mila “misk’icha”.
Tabla 3
Solubilidad del extracto seco hidroalcohólico al 70% DE Castilleja pumila “misk’icha”.
SOLVENTE SOLUBILIDAD
Agua
++
Etanol 40%
++
Etanol 70%
++
Etanol 90%
+
Acetona
+
Cloroformo
-
Hexano
-
Nota: +++ (Muy Soluble), ++ (Soluble), + (Medianamente
Soluble), --(Insoluble)
Para esta prueba de Solubilidad (Lock, 1994), se utilizó una cantidad considerable
del extracto en tubos de ensayo a los cuales se les añade aproximadamente 3 mL de los
solventes, este se agita, si el compuesto es soluble debe desaparecer gradualmente. De
las pruebas de solubilidad del extracto seco hidroalcohólico se evidencia que es soluble
en solventes polares como el agua, el alcohol al 40% y el etanol al 70%; medianamente
soluble en etanol al 90% y acetona e insoluble en solventes apolares como el cloroformo
y hexano. Siendo que el extracto no fue soluble completamente en ningún solvente
utilizado. Esto nos indica que la planta de Castilleja pumila “misk’icha” presenta mayor
concentración de metabolitos de alta polaridad.
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Determinación del Análisis Fitoquímico Cualitativo del extracto seco
hidroalcohólico al 70% Castilleja pumila “misk’icha”.
Tabla 4
Análisis Fitoquímico Cualitativo del Extracto seco Hidroalcohólico al 70% de Castilleja
pumila “misk’icha”
.
Análisis toquímico cualitativo
Metabolito secundario Reactivo Cantidad de metabolito
secundario presente en
extracto
Alcaloides Dragendor --
Lactonas Baljet +
Flavonoides Shinoda +++
Taninos Gelatina - sal --
Compuestos fenolicos Cloruro férrico ++
Azucares reductores Benedict // fehling +
Glicósidos Fehling // benedict +
Aminoácidos Ninhidrina ++
Saponinas Prueba de la espuma +
Esteroide Acetato de cobre
Lieberman burchar
+
Quinonas Borntrager +++
Nota: +++ (Abundante cantidad del metabolito), ++ (Regular cantidad del metabolito), + (Poca cantidad del meta-
bolito), -- (Ausencia del metabolito).
Se muestran los resultados realizados del análisis toquímico cualitativo (Lock,
1994), para la determinación de metabolitos secundarios del extracto seco hidroalcohólico
al 70% de Castilleja pumila “misk’icha”; este se basó en resultados obtenidos mediante
pruebas colorimétricas y de precipitación para cada metabolito a determinar. Por ende, se
valoró la presencia de abundante cantidad de metabolitos como quinonas, que dieron una
coloración roja con hidróxido de potasio, para los avonoides se realizó la reacción de
Shinoda que trabaja con ácido clorhídrico concentrado dando una coloración rojo cereza,
indicando una reacción positiva.
Así como regular cantidad de metabolitos secundarios, tales como aminoácidos en
la que se trabajó con la prueba de ninhidrina dando como resultado una coloración rojiza,
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y compuestos fenólicos, que dieron como reacción positiva la presencia de precipitado o
coloración azul-verdosas. Como metabolito secundario presente en abundante cantidad
está la quinona, que sería el responsable de la actividad coagulante, ya que ejerce una
actividad biológica relevante, siendo un ejemplo de ello la vitamina K1, que es un factor
importante en la coagulación sanguínea ya que interviene en la síntesis de protrombina
y la coenzima Q, una quinona que interviene en la cadena de transporte de electrones en
las células. (Ramírez, 2012).Para las otras pruebas se ha observado que no es notable
la presencia de ciertos compuestos como: saponinas, azúcares reductores, glicósidos,
lactonas y una presencia nula de metabolitos tales como: alcaloides y taninos. Con los
resultados se contribuye al conocimiento toquímico de esta especie.
Prueba de la Actividad Coagulante In Vitro.
Evaluación del Tiempo de Coagulación por el Método de White-Modicado.
Tabla 5
Resultados de la evaluación de la actividad coagulante in vitro con la adición del extrac-
to seco hidroalcohólico de Castilleja pumila “misk’icha” al 70% en muestras de sangre
venosa.
CONCENTRACION
DE EXTRACTOS A
PROBAR
N° DE MUESTRAS DE EXPERIMENTACION
M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 M9 M10
TIEMPO DE COAGULACION (MINUTOS)
NUMERO DE MUESTRAS OBTENI-
DAS POR PERSONA
C3 6’13” 7’07” 7’25” 8’06” 8’15” 8’22” 9’10” 9’13” 10’08” 10’24”
C2 6’15” 7’11” 7’29” 8’12” 8’19” 8’26” 9’15” 9’19” 10’12” 10’28”
C1 6’22” 7’13” 7’33” 8’21” 8’24” 8’31” 9’23” 9’25” 10’18” 10’36”
CONTROL 6’32” 7’22” 7’39” 8’29” 8’32” 8’39” 9’35” 9’38” 10’24” 10’48”
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Tabla 6
Disminución del tiempo de coagulación in vitro con la adición del extracto seco
hidroalcohólico de Castilleja pumila “misk’icha” al 70% en muestras de sangre venosa.
Grupos Concentración del
extracto (mg/mL)
Disminución de tiempo de
coagulación (minutos)
Porcentaje
(%)
CONTROL ---- 6.53
6.27
C1 0.01 6.36
C2 0.1 6.25
C3 1 6.21
De acuerdo al Método utilizado, para el Tiempo de Coagulación por el Método de
White-Modicado (Muñoz, 2005). Se observa una disminución del tiempo de coagulación
en minutos en las muestras de sangre venosa al trabajar las diferentes concentraciones
del extracto seco hidroalcohólico al 70% de Castilleja pumila “misk’icha”, así se puede
apreciar que a la dosis 1 (C1=0.01mg/mL) se obtuvo un promedio en la disminución del
tiempo de coagulación de 6.36 min.; en el caso de la dosis 2 (C2=0.1mg/mL) se obtuvo
un promedio en la disminución del tiempo de coagulación de 6.25 min.; por último,
en la dosis 3 (C3=1mg/mL) se obtuvo un promedio en la disminución del tiempo de
coagulación de 6.21 min.
Por lo que se puede determinar que a la dosis de concentración 3, (C3=1mg/mL),
se observa y constituye una dosis adecuada con la que se obtuvo un mejor promedio en
cuanto a la disminución del tiempo de coagulación.
Respecto a los valores obtenidos podemos decir que se encuentran en un promedio
de 6.27 min. del tiempo de coagulación, basados en la referencia de los valores normales
del tiempo de coagulación que nos brinda el Manual de Procedimientos de Laboratorio
en Técnicas Básicas de Hematología del Instituto Nacional de Salud; que nos muestra un
tiempo de 5 – 15 min. (INS, 2000.).
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Evaluación del Tiempo de Protrombina en plasma por el Método de Quick-
Modicado
Tabla 7
Resultados de la evaluación de la actividad del tiempo de protrombina in vitro con la
adición del extracto seco hidroalcohólico de Castilleja pumila “misk’icha” al 70% en
plasma.
CONCENTRACION
DE EXTRACTOS A
PROBAR
N° DE MUESTRAS DE EXPERIMENTACIÓN
M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 M9 M10
TIEMPO DE PROTROMBINA (SEGUNDOS)
NUMERO DE MUESTRAS
OBTENIDAS POR PERSONA
C3 11”30 11”42 12”26 12”35 12”56 13”20 13”42 13”60 14”10 14”36
C2 11”36 11”38 12”30 12”42 12”64 13”30 13”58 13”66 14”27 14”40
C1 11”52 11”62 12”38 12”58 12”80 13”54 13”76 13”70 14”43 14”54
CONTROL 11”80 12”12 12”44 12”86 13”08 13”66 13”75 13”88 14”56 14”63
Tabla 8
Resultados de la evaluación de la actividad del tiempo de protrombina desarrollados en
valores de INR.
CONCENTRACION
DE EXTRACTOS A
PROBAR
N° DE MUESTRAS DE EXPERIMENTACIÓN
M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 M9 M10
TIEMPO DE PROTROMBINA EN INR
NUMERO DE MUESTRAS OB-
TENIDAS POR PERSONA
C3 0.81 0.82 0.88 0.89 0.90 0.95 0.96 0.98 1.01 1.03
C2 0.87 0.88 0.95 0.96 0.97 1.02 1.05 1.05 1.10 1.11
C1 0.88 0.88 0.94 0.96 0.97 1.03 1.05 1.04 1.10 1.11
CONTROL 0.88 0.91 0.93 0.96 0.98 1.02 1.03 1.04 1.09 1.10
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Tabla 9
Disminución del tiempo de protrombina in vitro con la adición del extracto seco hidroalcohólico
de Castilleja pumila “misk’icha” al 70% en Plasma.
Grupos Concentración del extracto
(mg/mL)
Disminución de tiempo de pro-
trombina (segundos)
Porcentaje (%)
CONTROL 0.2 14.20
12.93
C1 0.01 13.41
C2 0.1 13.06
C3 1 12.33
Por denición el tiempo de Protrombina mide el tiempo que tarda en coagular
una muestra de plasma, desprovisto de plaquetas y anticoagulado con citrato sódico;
este tiempo es expresado en segundos; y bajo la referencia de los valores normales del
tiempo de protrombina que nos brinda el Manual de Procedimientos de Laboratorio en
Técnicas Básicas de Hematología del Instituto Nacional de Salud (INS, 2000.); que nos
muestra un tiempo de 12 – 14 seg.; en comparación con los valores obtenidos en nuestro
estudio, estos se encuentran dentro del rango del tiempo de protrombina, en un promedio
de 12.93 seg. por lo tanto, esto nos indica que la disminución del tiempo de protrombina
dependerá de la concentración del extracto que está en relación con la tromboplastina y el
hematocrito.
De acuerdo al Método utilizado para el Tiempo de Protrombina en plasma por el
Método de Quick-Modicado (Muñoz, 2005). Se observa una disminución del tiempo de
protrombina al trabajar las diferentes concentraciones del extracto seco hidroalcohólico
al 70% de Castilleja pumila “misk’icha” en plasma, así se puede apreciar que a la dosis
1 (C1=0.01mg/mL) se obtuvo un promedio en la disminución del tiempo de protrombina
de 13.41 seg.; en el caso de la dosis 2 (C2=0.1mg/mL) se obtuvo un promedio en la
disminución del tiempo de protrombina de 13.06 seg.; por último, en la dosis 3 (C3=1mg/
mL) se obtuvo un promedio en la disminución del tiempo de protrombina de 12.33 seg.
Por lo que se puede determinar que a la dosis 3 de concentración C3=1mg/mL, se observa
y constituye una dosis adecuada con la que se obtuvo un mejor promedio respecto a la
disminución del tiempo de protrombina en plasma.
Prueba de la Actividad Hemostática In Vivo.
Tabla 10
Resultados de la Evaluación de la actividad hemostática con la administración del extracto
seco hidroalcohólico de Castilleja pumila “misk’icha” al 70% en ratones con heridas.
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N° de grupo Concentración de extracto a
aplicar.
Nº de sujetos de experimentación
Tiempo de disminución
(minutos)
GRUPO Nº1 CONTROL
Ratón 1 2min/20seg
Ratón 2 2min/26seg
Ratón 3 2min/28seg
Ratón 4 2min/30seg
Ratón 5 2min/30seg
Ratón 6 2min/35seg
Ratón 7 2min/40seg
Ratón 8 2min/45seg
Ratón 9 2min/48seg
Ratón 10 2min/50seg
GRUPO Nº2 C1 = 0.01mg/mL
Ratón 1 1min/30seg
Ratón 2 1min/32seg
Ratón 3 1min/35seg
Ratón 4 1min/35seg
Ratón 5 1min/38seg
Ratón 6 1min/40seg
Ratón 7 1min/40seg
Ratón 8 1min/42seg
Ratón 9 1min/45seg
Ratón 10 1min/48seg
GRUPO Nº3 C2 = 0.1mg/mL
Ratón 1 1min/20seg
Ratón 2 1min/20seg
Ratón 3 1min/22seg
Ratón 4 1min/25seg
Ratón 5 1min/28seg
Ratón 6 1min/30seg
Ratón 7 1min/32seg
Ratón 8 1min/35seg
Ratón 9 1min/35seg
Ratón 10 1min/38seg
GRUPO Nº4 C3 = 1mg/mL
Ratón 1 1min/10seg
Ratón 2 1min/12seg
Ratón 3 1min/12seg
Ratón 4 1min/15seg
Ratón 5 1min/20seg
Ratón 6 1min/22seg
Ratón 7 1min/25seg
Ratón 8 1min/28seg
Ratón 9 1min/30seg
Ratón 10 1min/32seg
GRUPO Nº5 PATRÓN
Ratón 1 1min/30seg
Ratón 2 1min/32seg
Ratón 3 1min/35seg
Ratón 4 1min/35seg
Ratón 5 1min/38seg
Ratón 6 1min/40seg
Ratón 7 1min/40seg
Ratón 8 1min/42seg
Ratón 9 1min/43seg
Ratón 10 1min/45seg
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Ambiente, Comportamiento y Sociedad
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Tabla 11
Disminución del tiempo de hemostasia con la administración del extracto seco hidroal-
cohólico de Castilleja pumila “misk’icha” al 70% en ratones con heridas.
Grupos Concentración del
extracto (mg/kg)
Disminución de tiempo de
hemostasia (minutos)
Promedio (min)
C1 10 2.21
2.42
C2 100 2.42
C3 1000 2.63
PATRON 1000 3.18
Se observa una disminución del tiempo de hemostasia en heridas producidas a
ratones al trabajar las diferentes concentraciones del extracto seco hidroalcohólico al 70%
de Castilleja pumila “misk’icha”, así se puede apreciar que a la dosis 1 (C1=10mg/kg)
se obtuvo un promedio en la disminución del tiempo de hemostasia de 2.21 min.; en el
caso de la dosis 2 (C2=100mg/kg) se obtuvo un promedio en la disminución del tiempo
de coagulación de 2.42 min.; por último, en la dosis 3 (C3=1000mg/kg) se obtuvo un
promedio en la disminución del tiempo de coagulación de 2.63 min.
Por lo que se puede determinar que a la concentración 3, (C3=1000mg/kg), se
observa y constituye una dosis adecuada con la que se obtuvo un mejor promedio en
cuanto a la disminución del tiempo de hemostasia, esto también en relación con el patrón
utilizado, ácido tranexámico, (ANMAT; 2015). que presenta un promedio del tiempo de
disminución del tiempo de hemostasia de 3.18 min.
Esta prueba se realizó mediante el Método de Ivy modicado, (Muñoz, 2005), el
cual estudia la adhesión de las plaquetas al endotelio vascular y su capacidad para formar
el trombo plaquetario que detiene la hemorragia.
Bajo la referencia de los valores normales del tiempo de protrombina que nos
brinda el Manual de Procedimientos de Laboratorio en Técnicas Básicas de Hematología
del Instituto Nacional de Salud; (INS, 2000.); nos muestra un tiempo de 2 – 8 min.; en
relación con los resultados obtenidos, podemos decir que nuestros valores a las diferentes
dosis están dentro de los parámetros de valores normales.
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Pruebas de Toxicidad.
Evaluación de la Toxicidad Oral del extracto seco hidroalcohólico de Castilleja pu-
mila “misk’icha” al 70% en ratones de experimentación.
Tabla 12
Observación de la Fase I de la prueba de toxicidad aguda por vía oral en ratones del ex-
tracto seco hidroalcohólico de Castilleja pumila “misk’icha” al 70%.
GRUPO
DOSIS
(mg/kg)
N° de
Ratones
N° de ratones
muertos desde
los 5 min hasta
el día 14
OBSERVACIONES
Signos
Aspectos de
Comportamiento
1 Control 3 0
Piloerección:0
Somnolencia:0
Diarrea:0
Dolor abdominal:0
Temblores:0
Irritabilidad:0
Agresividad:0
Intranquilidad:0
Depresión:0
2 10 3 0
Piloerección:0
Somnolencia:0
Diarrea:0
Dolor abdominal:0
Temblores:0
Irritabilidad:0
Agresividad:0
Intranquilidad:0
Depresión:0
3 100 3 0
Piloerección:0
Somnolencia:0
Diarrea:0
Dolor abdominal:0
Temblores:0
Irritabilidad:0
Agresividad:0
Intranquilidad:1
Depresión:0
4 1000 3 0
Piloerección:0
Somnolencia:0
Diarrea:0
Dolor abdominal:0
Temblores:0
Irritabilidad:0
Agresividad:0
Intranquilidad:1
Depresión:0
Nota: 0: Nada, 1: Ligera, 2: Moderada, 3: Severa, 4: Muy severa
Evaluación de la Toxicidad Oral del extracto seco hidroalcohólico de Castilleja
pumila “misk’icha” al 70% en ratones de experimentación.
Se observan los resultados obtenidos de la Fase I de la prueba de Toxicidad Aguda
por vía Oral del Extracto seco Hidroalcohólico de Castilleja pumila “misk’icha” al 70%
en ratones, la cual fue aplicada en orden creciente según el método de Lorke, (Lorke,
1983), esta tabla nos muestra que los grupos no presentaron reacciones acorde a los signos
o aspectos de comportamiento evaluados en esta primera fase; lo que si podemos observar
es que respecto a la dosis de (100 y 1000 mg/kg) se ha observado una reacción en cuanto
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al comportamiento de los animales observándose una ligera intranquilidad. Lo cual puede
deberse a una respuesta innata del animal por haber estado sometido a manipulación.
Se interpreta que, bajo los resultados obtenidos, ninguno de los grupos de trabajo
presentó muerte de alguno de los animales después de los 14 días de administrada las
dosis del extracto. Por lo tanto, podemos decir que el Extracto seco Hidroalcohólico de
Castilleja pumila “misk’icha” al 70% no es tóxica, esto porque a las dosis sometidas
a los ratones en esta Fase I no se produjo la muerte de ninguno de los animales. Por
consiguiente, se procedió a trabajar la Fase II del ensayo de Toxicidad Aguda por Vía
Oral.
Tabla 13
Observación de la Fase II de la prueba de toxicidad aguda por vía oral en ratones del
extracto seco hidroalcohólico de Castilleja pumila “misk’icha” al 70%.
GRUPO
DOSIS
(mg/kg)
N° de Rato-
nes
N° de ratones
muertos desde
los 5 min hasta el
día 14
OBSERVACIONES
Signos
Aspectos de Comporta-
miento
1 Control 1 0
Piloerección:0
Somnolencia:0
Diarrea:0
Dolor abdominal:0
Temblores:0
Irritabilidad:0
Agresividad:0
Intranquilidad:0
Depresión:0
2 1600 1 0
Piloerección:0
Somnolencia:0
Diarrea:0
Dolor abdominal:0
Temblores:0
Irritabilidad:0
Agresividad:0
Intranquilidad:1
Depresión:0
3 2900 1 0
Piloerección:0
Somnolencia:0
Diarrea:0
Dolor abdominal:0
Temblores:0
Irritabilidad:1
Agresividad:0
Intranquilidad:2
Depresión:0
4 5000 1 0
Piloerección:0
Somnolencia:0
Diarrea:0
Dolor abdominal:0
Temblores:0
Irritabilidad:2
Agresividad:0
Intranquilidad:2
Depresión:0
Nota: 0: Nada, 1: Ligera. 2: Moderada, 3: Severa, 4: Muy severa
Se observan los resultados obtenidos de la Fase II de la prueba de Toxicidad
Aguda por vía Oral del Extracto seco Hidroalcohólico de Castilleja pumila “misk’icha”
al 70% en ratones, al administrar las dosis en forma creciente del extracto, los resultados
nos muestran que en los grupos de trabajo no se presentaron signos de piloerección,
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somnolencia, diarrea, temblores (contorsiones abdominales); por otro lado en cuanto a los
aspectos de comportamiento se observó que a la dosis de 1600 mg/kg el ratón presento
ligeramente una etapa de intranquilidad esto podría deberse a una reacción propia del
animal después de haber sido sometido a manipulación, también se observa que a la dosis
de 2900 mg/kg el ratón presento una moderada respuesta de intranquilidad y una ligera
respuesta de irritabilidad que fue disipándose al cabo de unos 30 min. Otra respuesta
que se obverso fue en la administración de la dosis de 5000 mg/kg en el que el ratón
presento una moderada reacción en cuanto a la irritabilidad e intranquilidad que duro
aproximadamente por 1 hora, después fue desapareciendo paulatinamente hasta llegar a
un comportamiento normal, esta reacción pudo deberse a factores externos, puesto que
los animales estaban cerca de un lugar con bastante ruido de automóviles.
Por los resultados obtenidos se puede armar que el Extracto seco Hidroalcohólico
de Castilleja pumila “misk’icha” al 70% no produjo una toxicidad signicativa a las dosis
utilizadas en la Fase II, (Lorke D. 1983) y tampoco se produjo la muerte de ninguno de los
animales de experimentación en los diferentes grupos de trabajo del ensayo de toxicidad.
Por lo cual se concluye que la DL50 › 5000 mg/kg del Extracto seco Hidroalcohólico de
Castilleja pumila “misk’icha” al 70%.
Evaluación de la Toxicidad Dérmica del extracto seco hidroalcohólico de Castilleja
pumila “misk’icha” al 70% en ratones de experimentación.
Tabla 14
Observación del ensayo de irritación dérmica aguda en ratones con el extracto seco
hidroalcohólico de Castilleja pumila “misk’icha” al 70%.
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Se observa que al ensayo de irritación primaria que se realizó con el extracto seco
hidroalcohólico de Castilleja pumila “misk’icha” al 70% en ratones, al administrar las
dosis empapadas en gasa y luego de realizar las observaciones en los periodos de tiempo
de 1h, 24h, 48h y 72h, no se observó la formación de eritema y/o edema, en una escala
apenas perceptible, considerando así, que el extracto al 70% no es una sustancia irritante.
La toxicidad por absorción dérmica de la sustancia en prueba, se desarrolló con la
nalidad de determinar los efectos de la dosis de la planta en estudio; es muy importante
la observación para señalar la aparición de síntomas o manifestaciones que indiquen daño
a la salud de los animales en estudio. (Martínez, 2007)
Discusión
Se evaluó la actividad coagulante, in vitro en muestras de sangre venosa y la
actividad hemostática y toxicidad aguda por vía oral y tópica in vivo en ratones albinos
Mus musculus; del extracto seco hidroalcohólico al 70% Castilleja pumila “misk’icha”.
Las pruebas de solubilidad demostraron que el extracto seco hidroalcohólico al
70% de Castilleja pumila “misk’icha”; es soluble en solventes polares principalmente
en agua, alcohol al 40% y 70% e insoluble en solventes apolares como el hexano y
el cloroformo. En el análisis toquímico del extracto seco hidroalcohólico al 70% de
Castilleja pumila “misk’icha” se obtuvo la mayor presencia de metabolitos secundarios
como los avonoides y quinonas, en regular cantidad se obtuvo metabolitos secundarios
como, compuestos fenólicos, aminoácidos, saponinas, azucares reductores, por otro
lado, no se evidenció la presencia de taninos y alcaloides. La evaluación respecto a
la disminución del tiempo de coagulación in vitro en muestras de sangre venosa; con
la adición de extracto seco hidroalcohólico al 70% de Castilleja pumila “misk’icha”;
obtuvimos un porcentaje desde la dosis 1 (C1=0.01mg/mL) hasta llegar a la dosis 3
(C3=1mg/mL); presentando un porcentaje de 15.67%, pudiendo concluir así, que el
extracto seco hidroalcohólico al 70% de Castilleja pumila “misk’icha” a la concentración
3 (C3=1mg/mL) es más efectiva.
Respecto a la evaluación de la disminución del tiempo de protrombina in vitro
en muestras de sangre venosa humana, utilizando plasma, con la adición del extracto
seco hidroalcohólico al 70% de Castilleja pumila “misk’icha” pudimos observar un
porcentaje desde la dosis 1 (C1=0.01mg/mL) hasta llegar a la dosis 3 (C3=1mg/
mL); presentando un porcentaje de 8.45%, siendo esta concentración la más
efectiva. Se determinó la actividad hemostática en heridas producidas en animales de
experimentación, del extracto seco hidroalcohólico al 70% de Castilleja pumila
“misk’icha”, se observó que el mejor tiempo se da la concentración 3 (C3=1mg/mL)
que presenta un porcentaje de disminución del tiempo de hemostasia de 10.34%,
concluyendo que esta es la dosis más efectiva.
Bajo estos resultados, podemos decir que la disminución del tiempo de
hemostasia es gracias a la presencia de avonoides, esto gracias a que a nivel vascular
presentan una interesante actividad, esto por la acción vitamínica P (efecto protector
de la pared vascular, debido a la disminución de la permeabilidad y el aumento de la
resistencia de los capilares). (Transito, 2002). También se puede atribuir la disminución
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del tiempo de hemostasia a la presencia de aminoácidos libres presentes en el extracto,
estos aminoácidos se encuentran en forma secuencial en la estructura génica del Factor
V, que forma el complejo protrombinasas que activa a la trombina, (Gómez, 2011)
ya que nuestro patrón, el ácido tranexámico (antibrinolítico), bloquea el efecto de
enlace entre la brina y la plasminógeno, disolución de coágulos (brinólisis), en dosis
reducidas, actúa como inhibidor competitivo. (Tengborn, 2012). Se evaluó la toxicidad
por vía oral en ratones albinos Mus musculus del extracto seco hidroalcohólico al 70% de
Castilleja pumila “misk’icha”, usando el modelo de Lorke de dos fases. En la primera
fase no se presentó ningún animal muerto a lo largo de los 14 días de prueba. Se prosiguió
con la segunda fase, la cual dio como resultado ninguna muerte de los animales en
las 24 horas; se llegó a la conclusión que el extracto seco hidroalcohólico al 70% de
Castilleja pumila “misk’icha no es tóxico por vía oral. Se evaluó la toxicidad aguda
tópica en ratones albinos Mus musculus del extracto seco hidroalcohólico al 70% de
Castilleja pumila “misk’icha”, por el método de Irritación Primaria en piel según Draize, se
concluye que al periodo de evaluación en tiempo de 1h, 24h, 48h, 72h; no se ha presentado
una reacción resaltante en la formación de eritema y/o edema, considerando así, que el
extracto al 70% no es una sustancia irritante. Se comparó la actividad hemostática del
extracto seco hidroalcohólico al 70% de Castilleja pumila “misk’icha” in vivo, frente al
ácido tranexámico, el trabajo demostró que a la dosis 3 (C3=1mg/mL) esta presentó un
porcentaje de disminución del tiempo de hemostasia de 10.34%, apreciándose que a esta
concentración el porcentaje de disminución del tiempo de coagulación es mayor, este
resultado es cercano al porcentaje de disminución del tiempo de hemostasia obtenido
de nuestro patrón (ácido tranexámico) de un 12.23%, lo que nos indica que la concentración
3 es la más efectiva.
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